共聚焦爬片培養貼壁細胞的操作步驟

共聚焦爬片培養貼壁細胞的實驗步驟：

實驗準備：提前半小時左右在37°C預熱培養基、PBS、胰酶。照紫外：2mL和10mL移液管、1.5mL離心管、WHB品牌共聚焦爬片。

實驗方法：

1、從培養箱中取出培養皿，鏡下觀察細胞狀態：密度、細胞形態、貼壁情況等。

2、在超凈臺內，放入預熱好的培養基、PBS和胰酶。點酒精燈，燒培養皿口，將原培養基吸掉。

3、清洗：加7mLPBS（根據細胞狀態調節量）至培養皿底部，前后輕柔搖勻，清洗細胞。

4、消化：看到雜質洗下來后，吸走PBS，加入3mL胰酶， 靜置5min（時間和量根據不同細胞調整）。5min后觀察細胞是否被消化。

5、終止消化：若消化下來，在底部加7mL培養基（根據觀察的細胞密度決定）終止消化，并用槍輕柔吹打多次，將壁上剩余細胞吹打下來，均勻后取少量計數。

6、根據需要的量稀釋細胞，細胞懸液滴滿共聚焦爬片表面后，放入培養箱，30分鐘左右細胞附著到爬片后，再沿內壁添加培養基，繼續培養。

7、細胞培養好后，吸取掉廢液，用鑷子夾在支架側面，取出支架。

8、雙手捏住支架兩側輕輕一拉即可輕松取出爬片，繼續接下來的培養實驗。

注意事項：

1、拿培養皿的時候注意液體不要沾到瓶口，且每次打開瓶口，都需要燒一下。

2、操作時其他物體不要從開口的皿上經過（以上兩條避免染菌）。

3、因為貼壁細胞更脆弱，因此放入培養皿中的液體都需要37°C預熱。

4、共聚焦爬片傾斜30°以上，輕拉，防止拉開一瞬間爬片掉落，防止爬片破裂。

5、此產品為一次性產品，不可重復使用，爬片區分正反面，拆開即用。